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MensajeTema: Dengue: Diagnóstico de laboratorio.   Sáb Mayo 11, 2013 12:07 am

Dengue: Diagnóstico de laboratorio.

El dengue es la principal enfermedad viral transmitida por artrópodos en el mundo. Su aparición y la de la variante hemorrágica en América Latina siguieron a la reinfestación de Aedes aegypti en la mayoría de los países de donde este vector había sido erradicado.

El virus del dengue pertenece a la familia Flaviviridae. Se trata de un virus ARN que cuenta con cuatro serotipos (DEN 1-4). Todos ellos se transmiten al ser humano por un mosquito del género Aedes, en las Américas principalmente el Aedes aegypti, que es de carácter domiciliario. En Argentina hay evidencias de circulación de otros flavivirus: encefalitis de San Luis (ESL), fiebre amarilla (FA) e Ilheus, que han sido aislados de pacientes, y Bussuquara, del que sólo se han encontrado anticuerpos. El virus del Nilo Occidental (VNO) ha sido aislado en equinos.

Su incidencia ha crecido rápidamente en las áreas tropicales y subtropicales: pasó de infestar unos pocos países en los años 50 a más de 100 países en el 2000. La Organización Mundial de la Salud reporta 50 millones de casos de fiebre de dengue (FD) por año y alrededor de 500.000 de fiebre de dengue hemorrágico (FDH), con una mortalidad que oscila entre el 1 y el 4,5%. El drástico incremento de la enfermedad, especialmente en los últimos 30 años, la ha convertido en un verdadero problema de salud pública, cuya expansión todavía no ha podido ser controlada. Esta tendencia se ha observado en países de Latinoamérica como Venezuela, Brasil, Paraguay, Cuba y Colombia.

La infección primaria por el virus del dengue puede presentarse de manera asintomática, como síndrome febril inespecífico o como un cuadro clínico típico de variada intensidad. La enfermedad se caracteriza por un estado febril agudo que compromete el estado general, asociado a cefalea, mialgias y leucopenia. La FD en general es autolimitada. Sin embargo, existe el riesgo de que evolucione hacia la forma grave, cuyas manifestaciones se relacionan con alteraciones de la hemostasia y un incremento de la permeabilidad vascular. Si no se instaura un manejo adecuado, esto puede llevar al paciente al choque hipovolémico y a la muerte.

Metodologías para el diagnóstico de laboratorio.

El diagnóstico de laboratorio es esencial para confirmar la enfermedad y analizar la situación en el marco de la salud pública. La infección en el hombre por un serotipo produce inmunidad de por vida contra la reinfección con ese serotipo, pero sólo protección temporal y parcial contra los otros. Las partículas virales son neutralizadas a medida que comienzan a aparecer los anticuerpos específicos, y el diagnóstico se realiza mediante técnicas serológicas en muestras que posean cinco o más días de evolución.

Existen varias pruebas de laboratorio para el diagnóstico de rutina. Las más difundidas son: inhibición de la hemoaglutinación (IHA), fijación del complemento (FC), neutralización en cultivos celulares (NT), ELISA de captura IgM (MAC-ELISA) y ELISA IgG. Los anticuerpos detectados por NT, ELISA IgG o IHA son de larga duración. Al interpretar resultados serológicos, debe tenerse en cuenta la reactividad cruzada entre los virus de la familia Flaviviridae.

Existen dos patrones de respuesta sérica a la infección aguda por dengue: la primaria se detecta en quienes no son inmunes a los flavivirus; la secundaria se observa en individuos con infección por dengue que han tenido una infección previa por un flavivirus (otro serotipo de dengue, FA, encefalitis japonesa, ESL, etc.). Los estudios realizados no han determinado si, además de los niveles, se ve afectada su duración temporal.

Las investigaciones sobre otros flavivirus (FA y VNO) demuestran que con esos agentes pueden detectarse niveles de anticuerpos IgM más allá del año de la infección o vacunación. La presencia de determinantes comunes a los flavivirus dentro de la glicoproteína E viral genera el alto grado de reactividad cruzada que existe en la mayoría de las técnicas serológicas de diagnóstico. La de neutralización es la más específica, aunque hay un cierto grado de reactividad cruzada entre los serotipos de dengue y con otros flavivirus. En infecciones primarias experimentales en primates no humanos y en humanos, se ha planteado que los anticuerpos neutralizantes son específicos de serotipo
y que la especificidad se incrementa en el tiempo. En las infecciones secundarias o secuenciales entre flavivirus en general, se detectan respuestas heterotípicas con mayor cruce serológico que en las infecciones primarias. Sin embargo, en el tiempo se incrementa la especificidad hacia el o los virus infectantes.

Normalmente, se emplea la reacción de neutralización para minimizar las reacciones heterólogas detectadas con las otras técnicas serológicas. Los anticuerpos neutralizantes en general son de la clase IgG, por lo cual se necesita el estudio de un par serológico para el diagnóstico de una infección aguda. La técnica de neutralización emplea stocks virales de título conocido y cultivos celulares. Una variante muy utilizada es la que enfrenta diluciones del suero del paciente con una cantidad conocida de los cuatro serotipos de virus del dengue por separado. Si el suero contiene anticuerpos neutralizantes, parte de las partículas virales empleadas en la prueba resultanneutralizadas; ese porcentaje de reducción es evaluado mediante coloración vital de los cultivos celulares. La presencia de anticuerpos neutralizantes se considera la mejor evidencia de inmunidad protectora y suele ser tenida en cuenta para realizar encuestas postepidémicas y evaluar cómo impacta en la población la circulación de un determinado serotipo.

Tomado de: Ramírez, Félix y colab.; Seroprevalencia de anticuerpos contra dengue en niño de uno a nueve años luego de una epidemia en Aguilares, Tucumán, año 2009. Revista Argentina de Salud Pública Vol 4 Nº 14 Marzo 2013.

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